本試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測支原體污染。這種染料會結合到DNA的A-T富集區域，因為支原體的DNA中A-T含量高（55％～80％），所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細胞經染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點，即為支原體的DNA染色斑，說明有支原體污染。Hoechst 33258的最大激發波長為346nm，最大發射波長為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，最大激發波長為352nm，最大發射波長為461nm。

操作步驟：

貼壁細胞：

1.被檢細胞接種于無菌的6孔細胞培養板中，接種密度為1-2×104。同時，接種正常無支原體感染的同種細胞，作為陰性對照。

2.5天后，先吸去培養液，再加入1ml的固定液，靜置20min，

3.吸去固定液，晾干。

4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞），37℃避光放置15-20min或室溫靜置20～30min。

5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml滅菌超純水洗滌三次，直接風干。風干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。

6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發光激發，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。

懸浮細胞：

1.收集需檢測的細胞，1500rpm，5min。

2.將收集的細胞涂片于載玻片上，再加1ml的固定液，靜置20min。

3.吸去固定液，晾干。

4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞），37℃避光放置15～20min或室溫靜置20～30min。

5.吸去Hoechst 33258工作液，用無菌水洗滌玻片3次，直接風干。風干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。

6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發光激發，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。

結果判斷（參考）：

陰性：僅見細胞的細胞核呈現黃綠色熒光。

陽性：除細胞外，細胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。

注意事項：

1.Hoechst工作液對人體有害，請注意防護。

2.固定液有刺激性氣味，建議在通風櫥進行固定。

3.支原體檢測時，最好用不含抗生素的培養液培養2～3代，這樣容易避免假陰性結果。

4.本試劑盒用于6孔板檢測時，可以進行50次檢測反應。

5.檢測支原體污染，可以使用支原體高效Vero細胞，這樣可以提高檢測靈敏度，即將被檢測樣品接種于Vero細胞進行檢測。

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標題:Nanoparticles (NPs)-mediated lncBCMA silencing to promote eEF1A1 ubiquitination and suppress breast cancer growth and metastasis

成員:Ke Yang, Lei Xu, Ying Xu, Qian Shen, Tao Qin, Yunfang Yu, Yan Nie, Herui Yao, Xiaoding Xu

論文因子:14.903 發表期刊:Acta Pharmaceutica Sinica B pmid:37655325

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標題:MOFs-based nanoagent enables dual mitochondrial damage in synergistic antitumor therapy via oxidative stress and calcium overload

成員:Bao Weier, Liu Ming, Meng Jiaqi, Liu Siyuan, Wang Shuang, Jia Rongrong, Wang Yugang, Ma Guanghui, Wei Wei, Tian Zhiyuan

論文因子:14.919 發表期刊:Nature Communications pmid:34737274

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標題:Engineered biomimetic nanoparticles achieve targeted delivery and efficient metabolism-based synergistic therapy against glioblastoma

成員:Lu Guihong, Wang Xiaojun, Li Feng, Wang Shuang, Zhao Jiawei, Wang Jinyi, Liu Jing, Lyu Chengliang, Ye Peng, Tan Hui, Li Weiping, Ma Guanghui, Wei Wei

論文因子:17.694 發表期刊:Nature Communications pmid:35864093

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標題:Immune strategies of silver pomfret (Pampus argenteus) infected with Nocardia seriolae at different infection stages

成員:Youyi Zhang, Jiabao Hu, Yuanbo Li, Feirong Yuan, Kaiheng Yan, Weiwei Gu, Man Zhang, Yaya Li, Xiang Huang, Cheng Zhang, Dingyuan Zhang, Shanliang Xu, Suming Zhou, Xiaojun Yan, Yajun Wang

論文因子:4.5 發表期刊:AQUACULTURE

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標題:CRISPR/SaCas9-based gene editing rescues photoreceptor degeneration throughout a rhodopsin-associated autosomal dominant retinitis pigmentosa mouse model

成員:Wei Du, Jiarui Li, Xin Tang, Wenzhen Yu, Mingwei Zhao

論文因子:3.2 發表期刊:EXPERIMENTAL BIOLOGY AND MEDICINE pmid:37837380

注意：以上文獻 僅供參考

支原體檢測試劑盒

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