注意：本產品試劑組分和操作步驟發生變化，使用前請仔細閱讀說明書。 

保存：本產品對光敏感，應該室溫避光儲存，保質期 2 年。無菌開封后，保存于室溫。 

試劑盒組成： 

試劑 A 200mL 室溫避光 

試劑 C 100mL 室溫避光 

紅細胞沉降液 100mL 室溫 

細胞洗滌液 200mL 室溫 

操作步驟一： 紅細胞沉降（僅供參考） 

沉降去除紅細胞：取骨髓單細胞懸液與血液稀釋液(注射用生理鹽水或 1×PBS)及紅細胞沉降液按 照 1:1:1 比例混勻，室溫下靜置 30-40min 后，可見紅細胞沉于試管底部，小心吸取上清層(富含白 細胞及血小板)用于后續細胞分離。 

操作步驟二： 

樣本分離（僅供參考） 

1. 樣本分離：當樣本體積小于 5mL 時,先在離心管中先加入 4mL 試劑 A，后將 2mL 試劑 C 小心疊加于試劑 A 之上，形成梯度界面(樣本體 積大于等于 5mL，試劑 A 與試劑 C 比例 2:1，試劑總量等于沉降后樣 本含量),將懸液小心平鋪于分離液液面上方。由于密度差異，可見明 顯的分層界面(注意二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會 影響分離效果)。 

2. 室溫條件下水平轉子 600-1000g ，25-30min(血液體積越大所需離 心力越大,離心時間越長,最佳分離條件需摸索，離心最大轉速不超過 1000g)。

3. 離心后，離心管中可見兩個環狀乳白色層，上層為單個核細胞層,下層即所需中性粒細胞層(受 個體差異及分離條件影響，粒細胞白膜層可能會出現顏色較淺的情況)。 

4. 用吸管吸取下層中性粒細胞白膜層至新的離心管中，加入 10mL 細胞清洗液洗滌細胞，250g，離 心 10min。 

5. 棄上清,加入 5mL 細胞清洗液重懸細胞,250g，離心 5min。 

6. 棄上清，重懸細胞備用。 

骨髓單細胞懸液制備： 

小動物骨髓的采集： 

1. 處死動物，無菌提取股骨和脛骨，剪去兩端軟骨，露出紅色的骨髓腔（注意盡可能少的剪走骨 髓腔）。 

2. 取 1ml 的無菌注射器，吸取少量的含有 10%標準胎牛血清的稀釋液或者是含有血清的培養基，沖 洗骨髓腔以獲得骨髓。 

3. 最終制備成 2×10 8–1×10 9 /ml 的單細胞懸液備用。 

大動物骨髓的采集： 

大動物骨髓的采集可采取活體穿刺方法：先將動物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚，然后估計好 皮膚到骨髓的距離，把骨髓穿刺針的長度固定好。操作人員用左手把穿刺點周圍的皮膚繃緊，右手 將穿刺針在穿刺點垂直刺入，輕輕左右旋轉將穿刺針鉆入，當穿刺針進入骨髓腔時常有落空感。連 接注射器緩慢抽吸骨髓組織，當注射器內抽到少許骨髓時即停止抽吸。用含 10%標準胎牛血清的稀 釋液調整細胞濃度為 2×10 8–1×10 9 /ml 的單細胞懸液備用。 

常用的骨髓穿刺點： 

股骨：穿刺部位在股骨內側面,靠下端的凹面處； 

胸骨：穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處； 

肋骨：穿刺部位是第 5～7 肋骨各點的中點； 

脛骨：穿刺部位是股骨內側、靠下端的凹面處。

如果穿刺采用的是肋骨，穿刺結束后要用膠布封貼 穿刺孔，防止發生氣胸。 

注意事項： 

A.開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免 微生物污染。 

B.分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是 溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層不清晰。 

C.血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血 2h 以內），為保持中性粒細胞的活性，應避免冷凍和冷藏。 

D.稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含 Ca、Mg 離子的緩沖液及培養液，其成分會導致血細胞凝集， 大大降低細胞得率及純度。

E.部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁，影響分離效果。 

F.血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調節離心轉數和離心時間，摸索 最佳的分離條件。 

G.如果要進一步對分離的細胞進行培養，注意全程保持無菌操作，避免微生物污染。 

H.不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應提 供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。

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標題:Punicalin attenuates LPS-induced acute lung injury by inhibiting inflammatory cytokine production and MAPK/NF-κB signaling in mice

成員:Wentao Ji, Xiaoting Zhang, Chao Sang, Huixian Wang, Keqian Zhou, Yan Zhang, Lulong Bo

論文因子:3.776 發表期刊:Heliyon pmid:37101633

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標題:Nanoparticle-inhibited neutrophil elastase prevents neutrophil extracellular trap and alleviates rheumatoid arthritis in C57BL/6 mice

成員:Min Liu, Siyi Liu, Lin Liu, Jingya Xiu, Tian Zhang, Dawei Chen, Mingxi Qiao, Haiyang Hu, Jiulong Zhang, Xiuli Zhao

論文因子:18.962 發表期刊:Nano Today

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標題:The critical role of pancreatic stone protein/regenerating protein in sepsis-related multiorgan failure

成員:Ping Hu, Yuan hua Lu, Wei Deng, Qi Li, Ning Zhao, Qiang Shao, Ling Wu, Xu zhen Wang, Ke jian Qian, Fen Liu

論文因子:5.058 發表期刊:Frontiers in Medicine pmid:37215716

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標題:Alcohol reshapes a liver premetastatic niche for cancer by extra- and intrahepatic crosstalk-mediated immune evasion

成員:Xiaofang Qiu, Jiaqi Zhou, Hong Xu, Yongyin Li, Shudong Ma, Hang Qiao, Kangxin Zeng, Qiongqiong Wang, Jiahe Ouyang, Yuanhan Liu, Jian Ding, Yantan Liu, Junhao Zhang, Min Shi, Yulin Liao, Wangjun Liao, Li Lin

論文因子:12.4 發表期刊:MOLECULAR THERAPY pmid:37469143

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標題:Abnormal adenosine metabolism of neutrophils inhibits airway inflammation and remodeling in asthma model induced by Aspergillus fumigatus

成員:Liu Ting-ting, Wang Yue-li, Zhang Zhi, Jia Li-xin, Zhang Jing, Zheng Shuai, Chen Zhi-hua, Shen Hua-hao, Piao Chun-mei, Du Jie

論文因子:3.1 發表期刊:BMC Pulmonary Medicine pmid:37452319

注意：以上文獻 僅供參考

小鼠骨髓中性粒細胞分離液試劑盒

小鼠骨髓中性粒細胞分離液試劑盒