注意：本產品試劑組分和操作步驟發生變化，使用前請仔細閱讀說明書。 

保存：本產品對光敏感，應該室溫避光儲存，保質期 2 年。無菌開封后，保存于室溫。 

試劑盒組成： 

試劑 A 200mL 室溫避光 

試劑 C 100mL 室溫避光 

紅細胞裂解液 100mL 室溫 

細胞洗滌液 200mL 室溫 

操作步驟一： 

紅細胞沉降（僅供參考） 沉降去除紅細胞：取新鮮抗凝血與血液稀釋液(注射用生理鹽水或 1XPBS)及紅細胞沉降液按照 1:1:1 比例混勻，室溫下靜置 30-40min 后，可見紅細胞沉于試管底部，小心吸取上清層(富含白細胞及血 小板)用于后續細胞分離。

操作步驟二： 

樣本分離（僅供參考） 

1. 樣本分離：當樣本體積小于 5mL 時,先在離心管中先加入 4mL 試 劑 A，后將 2mL 試劑 C 小心疊加于試劑 A 之上，形成梯度界面(樣本 體積大于等于 5mL，試劑 A 與試劑 C 比例 2:1，試劑總量等于沉降后 樣本含量),將懸液小心平鋪于分離液液面上方。由于密度差異，可見 明顯的分層界面(注意二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則 會影響分離效果)。 

2. 室溫條件下水平轉子 600-1000g ，25-30min(血液體積越大所需離心力越大,離心時間越長,最佳分離條件需摸索，離心最大轉速不超過 1000g)。 

3. 離心后，離心管中可見兩個環狀乳白色層，上層為單個核細胞層,下層即所需中性粒細胞層(受 個體差異及分離條件影響，粒細胞白膜層可能會出現顏色較淺的情況)。 

4. 用吸管吸取下層中性粒細胞白膜層至新的離心管中，加入 10mL 細胞清洗液洗滌細胞，250g，離 心 10min。 

5. 棄上清,加入 5mL 細胞清洗液重懸細胞,250g，離心 5min。 

6. 棄上清，重懸細胞備用。

注意事項： 

A.開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免 微生物污染。 

B.分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是 溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層不清晰。 

C.血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血 2h 以內），為保持中性粒細胞的活性，應避免冷凍和冷藏。 

D.稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含 Ca、Mg 離子的緩沖液及培養液，其成分會導致血細胞凝集， 大大降低細胞得率及純度。 

E.部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁，影響分離效果。 

F.血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調節離心轉數和離心時間，摸索 最佳的分離條件。 

G.如果要進一步對分離的細胞進行培養，注意全程保持無菌操作，避免微生物污染。 

H.不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應提 供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。

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標題:Free fatty acids promote degranulation of azurophil granules in neutrophils by inducing production of NADPH oxidase–derived reactive oxygen species in cows with subclinical ketosis

成員:Yuxiang Song, Shang Jiang, Congyi Li, Juan J. Loor, Qianming Jiang, Yuchen Yang, Xiancheng Feng, Siyuan Liu, Jiyuan He, Kexin Wang, Yunfei Li, Cai Zhang, Xiliang Du, Zhe Wang, Xinwei Li, Guowen Liu

論文因子:4.225 發表期刊:JOURNAL OF DAIRY SCIENCE pmid:34998570

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標題:β-hydroxybutyrate enhances bovine neutrophil adhesion by inhibiting autophagy

成員:He Jiyuan, Wang Kexin, Liu Mingchao, Zeng Wen, Li Dong, Majigsuren Zolzaya, Batbaatar Tugsjargal, Li Yunfei, Liu Siyuan, Du Xiliang, Lei Lin, Song Yuxiang, Liu Guowen

論文因子:7.3 發表期刊:Frontiers in Immunology pmid:36713365

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標題:Medium chain fatty acid supplementation improves animal metabolic and immune status during the transition period: A study on dairy cattle

成員:Wang Zhonghan, Wang Qianqian, Tang Chuanlan, Yuan Jing, Luo Chenglong, Li Dong, Xie Tian, Sun Xiaoge, Zhang Yan, Yang Zhantao, Guo Cheng, Cao Zhijun, Li Shengli, Wang Wei

論文因子:7.3 發表期刊:Frontiers in Immunology pmid:36776875

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標題:汕-Hydroxybutyrate impairs the directionality of migrating neutrophil through inhibiting the autophagy-dependent degradation of Cdc42 and Rac1 in ketotic cows

成員:Yuchen Yang, Shang Jiang, Jing Yang, Xiancheng Feng, Chao Wang, Kexin Wang, Wenwen Gao, Xiliang Du, Lin Lei, Zhe Wang, Guowen Liu, Yuxiang Song, Xinwei Li

論文因子:3.5 發表期刊:JOURNAL OF DAIRY SCIENCE pmid:37641273

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標題:Store-operated Ca2+ entry-sensitive glycolysis regulates neutrophil adhesion and phagocytosis in dairy cows with subclinical hypocalcemia

成員:Bingbing Zhang, Wei Zhang, Yuxin He, Xinru Ma, Ming Li, Qianming Jiang, Juan J. Loor, Xinquan Lv, Wei Yang, Chuang Xu

論文因子:4.225 發表期刊:JOURNAL OF DAIRY SCIENCE pmid:37164848

注意：以上文獻 僅供參考

牛外周血中性粒細胞分離液試劑盒

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