一起來(lái)了解感受態(tài)的知識(shí)總結(jié)

更新時(shí)間：2025-11-06

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問(wèn)01:	實(shí)驗(yàn)中遇到TOP-10轉(zhuǎn)化后無(wú)法長(zhǎng)出菌落
答01:	1、檢測(cè)下感受態(tài)是否有問(wèn)題：在不含有抗性的平板上做個(gè)空白驗(yàn)證；2、是否轉(zhuǎn)化成功？可以用別的質(zhì)粒試一下；3、42℃熱激45s或是60s試一下

問(wèn)02:	高濃度時(shí)沒(méi)有抗性作用，和預(yù)期的結(jié)果不相符。以前用的是上海生工的潮霉素，相同濃度值沒(méi)有效果！
答02:	不同廠家的抗生素效價(jià)有區(qū)別，我們用大腸桿菌做抑菌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)150ug/ml可以抑菌，低濃度沒(méi)有抑菌效果。真菌的用量需要比細(xì)菌濃度高一些。（對(duì)于植物細(xì)胞，其有效濃度是20–200μg/ml；對(duì)于細(xì)菌，有效濃度是20–200μg/ml；對(duì)于真菌，有效濃度是200μg–1 mg/ml）。建議您增加一下用量。

問(wèn)03:	C1100 DH5α感受態(tài)細(xì)胞我們連接產(chǎn)物做轉(zhuǎn)化涂板后不長(zhǎng)斑，三個(gè)人做了不同的轉(zhuǎn)化都是一樣的結(jié)果
答03:	1、確認(rèn)下連接條件是否合適，要注意連接產(chǎn)物搖菌時(shí)不可以加含有抗生素的培養(yǎng)基；2、用質(zhì)粒轉(zhuǎn)化試一下是否也不長(zhǎng)菌或是做個(gè)空白對(duì)照。

問(wèn)04:	你們公司幾種感受態(tài)的區(qū)別？
答04:	1、C1100 DH5菌株：克隆菌，用于分子克隆、質(zhì)粒提取。可用于藍(lán)白斑篩選。 2、C1200 TOP-10菌株：克隆菌，用于分子克隆，質(zhì)粒提取。可用于藍(lán)白斑篩選。該菌株適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。 3、C1300 JM109菌株：克隆菌，用于分子克隆。一種支持帶有琥珀突變的載體生長(zhǎng)的重組缺陷的抑制型菌株，對(duì)轉(zhuǎn)染的DNA有修飾作用而無(wú)限制作用。 4、C1400 BL21(DE3)菌株：表達(dá)菌，可用于表達(dá)非毒性蛋白。該菌株用于高效表達(dá)克隆于含有T7噬菌體啟動(dòng)子的表達(dá)載體的基因。適合非毒性蛋白的表達(dá)。 5、C1500 BL21(DE3)pLysS菌株：表達(dá)菌，可表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。pLysS菌株含有pLysS質(zhì)粒，因此具有氯霉素抗性。pLysS質(zhì)粒含有表達(dá)T7溶菌酶的基因，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾目的蛋白的表達(dá)。適合毒性蛋白和非毒性蛋白的表達(dá)。

問(wèn)05:	藍(lán)白斑篩選，選的是藍(lán)色的菌落還是白色的？
答05:	在含有X-gal和IPTG的篩選培養(yǎng)基上，攜帶載體DNA的轉(zhuǎn)化子為藍(lán)色菌落，而攜帶插入片段的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化子為白色菌落，平板如在37℃培養(yǎng)后放于冰箱3-4小時(shí)可使顯色反應(yīng)充分，藍(lán)色菌落明顯。

問(wèn)06:	常用抗生素推薦使用濃度？
答06:	氨芐青霉素(Amp)：100ug/mL（細(xì)菌）；卡那霉素(kan)：10-50ug/mL（細(xì)菌）；鏈霉素(str)：10-100ug/mL；利福平（Rif）：50-100ug/mL；慶大霉素：10-50ug/mL；兩性霉素：0.25ug/mL

問(wèn)07:	連接轉(zhuǎn)化效率低？
答07:	1、連接體系不合適；2、平末端不易連接，4°過(guò)夜，動(dòng)作一定要輕柔；3、縮短熱激時(shí)間，改為45s；4、檢測(cè)酶是否合適（pfu擴(kuò)增需單獨(dú)加ployA尾巴）

問(wèn)08:	轉(zhuǎn)化后長(zhǎng)出雜菌？
答08:	如果是單菌落周?chē)L(zhǎng)出來(lái)衛(wèi)星菌落，說(shuō)明培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，菌株老化了，對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)影響不大，活化一下就好；如果是大小差不多的菌落，說(shuō)明操作過(guò)程中污染了

問(wèn)09:	轉(zhuǎn)化后只長(zhǎng)出幾個(gè)菌落？
答09:	1、若果是轉(zhuǎn)化的連接產(chǎn)物或是突變產(chǎn)物正常；若是質(zhì)粒，則注意下是否操作有問(wèn)題；2、有些質(zhì)粒的確轉(zhuǎn)化率低，可以換一種感受態(tài)試一下

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