干細(xì)胞是一種未充分分化，具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞，在一定誘導(dǎo)條件下，可以分化為成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞和成肌細(xì)胞等，還可以分化為巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等骨髓基質(zhì)細(xì)胞，具有發(fā)育為骨、軟骨、脂肪、肌肉、真皮及骨髓基質(zhì)等中胚層組織的潛能。

Solarbio新增了成骨/成脂誘導(dǎo)迷你化合物Kit，每種Kit均由對(duì)應(yīng)種類經(jīng)典的可用于誘導(dǎo)的基礎(chǔ)試劑、用于鑒定與分析的高品質(zhì)染料以及相關(guān)試劑組成，具有良好的生物活性。客戶也可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需求刪減或添加其他的化合物，也可靈活定制專屬Kit，所有組分均已經(jīng)過NMR、HPLC或MS檢測(cè)，以確保化合物純度和準(zhǔn)確性。

1. 接種骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，按照2×10⁴cells/cm²的細(xì)胞密度接種至包被后的培養(yǎng)器皿中，于37℃，5% CO₂培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)至相應(yīng)的融合度（成骨誘導(dǎo)：60~70%；成脂誘導(dǎo)：90~100%），棄掉上清，加入成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基（含有地塞米松、維生素C、茜素紅等）或成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基（含有地塞米松、胰島素、吲哚美辛和IBMX）。

2. 細(xì)胞分化誘導(dǎo)

成骨誘導(dǎo)：每2~3天更換誘導(dǎo)培養(yǎng)基，于37℃，5%CO₂培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)，并注意觀察細(xì)胞形態(tài)變化（一般約14~28天左右）。根據(jù)細(xì)胞鈣鹽結(jié)晶析出和鈣質(zhì)結(jié)節(jié)形成的情況，決定終止細(xì)胞誘導(dǎo)的時(shí)間，進(jìn)行后續(xù)固定和染色鑒定（茜素紅染色）。

成脂誘導(dǎo)：于37℃，5%CO₂培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約2~3天，更換為成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基維持液（只含有胰島素）培養(yǎng)1天。按照以上換液頻率繼續(xù)誘導(dǎo)（一般是3個(gè)循環(huán)，約14天左右），并注意觀察細(xì)胞形態(tài)變化。根據(jù)細(xì)胞誘導(dǎo)形成的脂滴數(shù)量和大小，決定終止細(xì)胞誘導(dǎo)的時(shí)間，并進(jìn)行后續(xù)固定和染色鑒定（油紅O染色）。

3. 細(xì)胞固定

吸去培養(yǎng)基，使用適量1×PBS清洗一次，棄去后取適量4%中性甲醛溶液覆蓋培養(yǎng)器皿底面，室溫固定30~60 min，棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次。

4. 染色鑒定

加入適量的染色工作液，染色合適的時(shí)間（茜素紅：3~5min；油紅O：靜置染色30min），吸去染液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1×PBS避免細(xì)胞干燥。

5. 誘導(dǎo)評(píng)估與分析

顯微鏡下觀察染色效果，并進(jìn)行圖像采集和誘導(dǎo)評(píng)估。誘導(dǎo)成功時(shí)，成骨誘導(dǎo)后的鈣質(zhì)結(jié)節(jié)會(huì)與茜素紅染料結(jié)合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色。成脂誘導(dǎo)后的脂滴會(huì)與油紅O染料結(jié)合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色。

對(duì)于成骨誘導(dǎo)還可以進(jìn)行半定量分析，上述顯微觀察結(jié)束后，棄上清，加入氯化十六烷基吡啶溶液，室溫下孵育15~60min溶解礦化結(jié)節(jié)（茜素紅），然后在562 nm處檢測(cè)上清的OD值。